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看圖例了解二手液質(zhì)聯(lián)用儀檢測流程

更新時(shí)間:2022-06-15      點(diǎn)擊次數(shù):1329

如今蛋白組/代謝組學(xué)被廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)領(lǐng)域,液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)(液質(zhì)聯(lián)用)是蛋白組/代謝組學(xué)研究的主要手段,因此液質(zhì)聯(lián)用受到了醫(yī)學(xué)科學(xué)們非常大的重視。


液質(zhì)聯(lián)用儀是將液相色譜儀與質(zhì)譜儀聯(lián)用的儀器,用于樣品定性定量分析。其特點(diǎn)是將應(yīng)用范圍非常廣的液相色譜分離方法與靈敏、專屬、能提供分子量和結(jié)構(gòu)信息的質(zhì)譜法結(jié)合起來的一種現(xiàn)代分析技術(shù)。


二手液質(zhì)聯(lián)用儀技術(shù)原理:


樣品通過液相色譜分離后的各個(gè)組分依次進(jìn)入質(zhì)譜檢測器,各組分在離子源被離子化,產(chǎn)生帶有一定電荷、質(zhì)量數(shù)不同的離子。不同離子在電磁場中的運(yùn)動(dòng)行為不同,采用質(zhì)量分析器按不同質(zhì)荷比(m/z)把離子分開,得到依質(zhì)荷比順序排列的質(zhì)譜圖。通過對(duì)質(zhì)譜圖的分析處理,可以得到樣品的定性和定量結(jié)果。


液相色譜分析的一般流程圖解

液相色譜分析的一般流程圖解


液相色譜部分由進(jìn)樣系統(tǒng)、輸液系統(tǒng)、分離系統(tǒng)三個(gè)部分組成


(1)進(jìn)樣裝置要求密封性好,死體積小,重復(fù)性好,中心進(jìn)樣,進(jìn)樣時(shí)對(duì)色譜系統(tǒng)的壓力、流量影響小。


(2)輸液系統(tǒng)主要的是梯度洗脫裝置——有兩種方式:一種稱低壓梯度,指常壓下溶劑按一定比例混合后再由高壓泵輸入色譜柱,又稱外梯度;另一種稱高壓梯度,指先用高壓泵將各溶劑輸入混合器混合,再送入色譜柱,也稱為內(nèi)梯度。


(3)分離系統(tǒng)包括色譜柱、連接管和恒溫器等。與單純LC相比,LC-MS一般流速較低(高流速可能影響霧化效果),所以一般用窄徑柱,即2 mm或2.1mm的,粒徑一般為3.5μm,也有1.7μm的。


質(zhì)譜的電離與質(zhì)量分析流程圖解

質(zhì)譜的電離與質(zhì)量分析流程圖解


(1)ESI電離:其工作原理是將液滴變成蒸汽,產(chǎn)生離子發(fā)射的過程中形成的溶劑由液相泵輸送到ESI Probe,經(jīng)其內(nèi)的不銹鋼毛細(xì)管流出,這時(shí)給毛細(xì)管加2-4 kv的高壓,由于高壓和霧化氣的作用,流動(dòng)相從毛細(xì)管頂端流出時(shí),會(huì)形成扇狀噴霧,使液滴生成含樣品和溶劑離子的氣溶膠。ESI屬于zui軟的電離方式,通常只產(chǎn)生分子離子峰。適合熱不穩(wěn)定的極性分子,能分析小分子及大分子。


(2)四極桿質(zhì)量分析器:四極桿內(nèi)所包圍的空間存在雙曲線形電場。從離子源入射的加速離子穿過四極桿中的電場會(huì)受到電場作用,只有選定的m/z離子以限定的頻率穩(wěn)定的通過四極桿質(zhì)量分析器,其他離子則碰到極桿上被吸濾掉,不能通過,即達(dá)到“濾質(zhì)"的作用。四極桿質(zhì)量分析器結(jié)構(gòu)緊湊,體積小,掃描速度快,適用于LC-MS聯(lián)用儀。


二手液質(zhì)聯(lián)用儀檢測流程總結(jié)


所謂液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜實(shí)驗(yàn),就是通過液相色譜把要分析的混合物分離開,再用質(zhì)譜對(duì)某個(gè)或某些分子進(jìn)行定性或定量。它的強(qiáng)大功能使之不僅能輕松面對(duì)單個(gè)分子的研究,更加適合針對(duì)于復(fù)雜樣本的“組學(xué)"分析。由于蛋白質(zhì)和小分子性質(zhì)的差異,面向蛋白組學(xué)和代謝組學(xué)的液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)也有所區(qū)別,我們將在后續(xù)的篇幅中介紹液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)在各類學(xué)研究中的應(yīng)用,敬請(qǐng)期待。

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